在分子生物實(shí)驗(yàn)中，PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）作為基礎(chǔ)技術(shù)之一，廣泛應(yīng)用于病原檢測(cè)、基因表達(dá)分析、文庫(kù)建庫(kù)等領(lǐng)域。然而，傳統(tǒng)的手動(dòng)PCR體系搭建不僅耗時(shí)耗力，而且容易出現(xiàn)人為誤差。Opentrons Flex PCR 工作站正是為解決這些問(wèn)題而誕生的自動(dòng)化平臺(tái)，適合中高通量實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR相關(guān)流程的標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)處理。
本篇教程將為您提供一份從開機(jī)準(zhǔn)備到實(shí)驗(yàn)運(yùn)行的全流程操作指南，讓您快速上手 Opentrons Flex PCR 平臺(tái)，充分釋放其在自動(dòng)移液與建庫(kù)流程中的高效能。

移液工作站

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作
在正式啟動(dòng) Opentrons Flex PCR 操作前，請(qǐng)確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境處于潔凈、無(wú)塵、溫濕度穩(wěn)定的狀態(tài)。提前準(zhǔn)備好以下材料：
PCR所需試劑（如模板DNA、引物、酶、反應(yīng)緩沖液等）
符合規(guī)格的96孔或384孔PCR板
低吸附吸頭（與Flex移液模塊兼容）
冷卻模塊（建議啟用，用于保護(hù)酶活性）
預(yù)加載好程序的控制電腦
所有耗材建議使用無(wú)DNA酶/RNA酶污染的認(rèn)證產(chǎn)品，以防實(shí)驗(yàn)失敗。

二、開機(jī)與平臺(tái)初始化
啟動(dòng) Opentrons Flex PCR 工作站 后，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)完成基本初始化，包括機(jī)械臂自檢、模塊對(duì)位、系統(tǒng)更新檢測(cè)等。打開控制軟件后，進(jìn)入儀器主界面，用戶可選擇創(chuàng)建新的實(shí)驗(yàn)流程或載入已有模板。
如果是首次使用建議：
先校準(zhǔn)吸頭裝配位置與孔板位置；
運(yùn)行一次空板檢測(cè)流程，確保機(jī)械臂無(wú)偏移；
激活冷卻模塊與吸頭更換系統(tǒng)。
所有參數(shù)設(shè)定都可通過(guò)軟件的圖形化界面完成，操作直觀。

三、構(gòu)建PCR自動(dòng)化流程
Opentrons Flex PCR 的操作邏輯由多個(gè)“步驟模塊”構(gòu)成，例如“吸液”、“分液”、“混合”、“更換吸頭”、“等待時(shí)間”等，用戶可按實(shí)驗(yàn)需求自定義組合。
以PCR體系配置為例：
加載反應(yīng)板和吸頭：將吸頭盒和PCR板放置在平臺(tái)指定位置，對(duì)應(yīng)軟件內(nèi)的槽位設(shè)定。
吸取 Master Mix：設(shè)定源孔、吸液體積、吸速、預(yù)混參數(shù)。
分配 Master Mix 至每孔：設(shè)定目標(biāo)孔、加液體積與加樣順序。
吸取模板DNA：設(shè)定模板源與體積，避免樣本交叉污染。
分配模板至對(duì)應(yīng)孔：分組加樣、混合后完成反應(yīng)體系構(gòu)建。
完成后提示封板與離開平臺(tái)：避免污染并進(jìn)入PCR擴(kuò)增階段。
整個(gè)流程可保存為模板，下次直接載入復(fù)用，極大節(jié)省操作時(shí)間。

四、運(yùn)行與監(jiān)控實(shí)驗(yàn)流程
流程設(shè)置完畢后，點(diǎn)擊“Run”開始執(zhí)行自動(dòng)化流程。運(yùn)行過(guò)程中，系統(tǒng)會(huì)實(shí)時(shí)顯示進(jìn)度條、當(dāng)前步驟、剩余時(shí)間等信息。如果系統(tǒng)檢測(cè)到吸頭安裝異常、移液壓力波動(dòng)或板位偏移，將自動(dòng)暫停并提示用戶干預(yù)。
在Flex平臺(tái)上運(yùn)行PCR體系配置，不僅顯著提高了操作效率，也有效消除了人為誤差，使每一次加樣更穩(wěn)定、更可控。
建議用戶開啟日志功能，將每次操作自動(dòng)生成報(bào)告文檔，便于質(zhì)量追蹤與實(shí)驗(yàn)溯源。

五、完成實(shí)驗(yàn)后的處理
當(dāng)平臺(tái)完成加樣任務(wù)后：
手動(dòng)封板：使用光學(xué)透明膜或PCR封板膜進(jìn)行密封。
轉(zhuǎn)移至熱循環(huán)儀：根據(jù)反應(yīng)體系所需設(shè)定循環(huán)參數(shù)。
清理平臺(tái)：取下PCR板與吸頭盒，使用無(wú)塵布或酒精擦拭平臺(tái)殘留液體。
關(guān)機(jī)或進(jìn)入待機(jī)模式：若不繼續(xù)操作，可將系統(tǒng)關(guān)閉或轉(zhuǎn)入節(jié)能待機(jī)狀態(tài)。
建議每次實(shí)驗(yàn)后檢查吸頭廢棄槽與模塊狀態(tài)，定期運(yùn)行校準(zhǔn)流程，確保平臺(tái)始終保持高精度運(yùn)行。

六、常見(jiàn)問(wèn)題與注意事項(xiàng)
在使用 Opentrons Flex PCR 工作站 過(guò)程中，如遇以下問(wèn)題可參考處理建議：
吸液不準(zhǔn)：檢查吸頭裝配是否到位，液體是否存在氣泡。
混合不均：嘗試增加混合次數(shù)或設(shè)定吸吐速率。
吸頭丟失或偏移：重新校準(zhǔn)吸頭安裝位置或更換耗材。
模板交叉污染：確保每次樣本吸液前進(jìn)行吸頭更換。
同時(shí)，建議定期更新軟件版本，獲取最新的Bug修復(fù)和功能增強(qiáng)。

通過(guò)本文教程，您已經(jīng)全面了解了 Opentrons Flex PCR 工作站在PCR反應(yīng)體系搭建中的標(biāo)準(zhǔn)操作流程。從設(shè)備初始化、流程設(shè)計(jì)到樣本分配與平臺(tái)維護(hù)，每一個(gè)環(huán)節(jié)都圍繞“高效、精準(zhǔn)、可重復(fù)”三大核心價(jià)值展開。
在PCR通量日益增長(zhǎng)、手工操作瓶頸日益顯著的今天，F(xiàn)lex平臺(tái)的引入，不僅為實(shí)驗(yàn)室?guī)?lái)了效率上的突破，更為科研結(jié)果的穩(wěn)定性提供了堅(jiān)實(shí)保障。
如需獲取具體流程模板、定制培訓(xùn)支持，歡迎隨時(shí)與我們聯(lián)系，讓PCR實(shí)驗(yàn)真正邁入“自動(dòng)化”新紀(jì)元。

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