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DNA稀釋

一種降低DNA濃度的方法,以更好地適應各種生物學程序,如聚合酶鏈反應(PCR)、DNA測序、分子克隆和實時聚合酶鏈反應(qPCR)。

稀釋 DNA 通常是通過標準稀釋、系列稀釋或使用分光光度計進行的,對精度和準確性要求很高,人工移液面臨的挑戰(zhàn)包括不準確、DNA 降解和交叉污染。通過液體處理系統(tǒng)實現自動化可提高準確性、可重復性、效率和吞吐量,同時降低污染風險,從而改善流程。

稀釋 DNA 的工作流程

各種工作流程都需要稀釋 DNA,例如:

  1. 聚合酶鏈式反應 (PCR):PCR 需要特定濃度的 DNA 作為起始材料
  2. DNA 測序:Sanger 和下一代測序(NGS) 都需要特定的 DNA 濃度
  3. 分子克隆:DNA稀釋對于優(yōu)化連接反應是必要的
  4. 定量 PCR (qPCR):與 PCR 類似,qPCR 需要最佳 DNA 濃度才能進行準確定量。

DNA 稀釋從未如此簡單

OT-2 是一款臺式液體處理器,其設計足夠方便且靈活,可以自動化許多常見的應用。

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稀釋 DNA 的最佳方法1.  標準稀釋: 將特定體積的 DNA 添加到緩沖溶液中以降低濃度。
2. 連續(xù)稀釋: 在此過程中,先進行初始稀釋,然后逐步進行進一步稀釋。這允許使用一系列濃度來優(yōu)化實驗條件。3.  使用分光光度計稀釋:使用分光光度計測量DNA濃度,然后使用緩沖溶液將DNA稀釋至所需濃度。

協議聚焦

Opentrons 可幫助您使用 OT-2和 Opentrons Flex 的開源協議自動進行 DNA 稀釋

為何稀釋 DNA 如此困難?

由于需要精確度和準確度,稀釋 DNA 可能具有挑戰(zhàn)性。測量中的小錯誤可能會導致最終 DNA 濃度的顯著差異,從而影響下游應用。此外,DNA 容易降解和污染,這可能發(fā)生在稀釋過程中。

使用手動移液稀釋 DNA 的主要挑戰(zhàn)

  1. 不準確和不精確:移液時的細微差別可能會導致 DNA 濃度出現重大差異。
  2. DNA 降解:如果處理不當,DNA 可能會在此過程中降解。
  3. 交叉污染:如果移液器沒有正確清潔,則存在交叉污染的風險。

自動化 DNA 稀釋過程

自動化液體處理系統(tǒng)可用于自動化 DNA 稀釋過程。這些機器可以準確分配精確量的 DNA 和稀釋劑,從而降低人為錯誤的風,險并提高可重復性。自動化方案可以輕松調整以創(chuàng)建一系列 DNA 濃度。

自動化比手動移液稀釋 DNA 的優(yōu)勢

  1. 提高精確度和準確性: 與手動移液相比,自動化系統(tǒng)能更精確地處理極小體積和高濃度的 DNA。
  2. 時間效率高: 自動化系統(tǒng)可同時稀釋多個樣本,大大減少了稀釋過程所花費的時間。
  3. 降低污染風險:自動化系統(tǒng)可將交叉污染和 DNA 降解的風險降至最低。

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